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高效液相色谱柱的选择及怎么装柱介绍

发布时间:2021-11-23      点击次数:1890
高效液相色谱柱的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。
高效液相色谱柱怎么装柱:
1. 色谱柱应该是可以直接接在匀浆罐上的,如果不能,则需要一个转换接头。这个转换接头的尺寸很重要,既要能防止漏液,又要避免过硬或尺寸不合适而导致色谱柱接口螺纹的损坏;
2. 具体装柱过程一般来说是①先以合适的匀浆液(多为有机溶剂,刘国诠老师的《色谱柱技术》一书中列的比较全,可供参考)将填料充分分散(可以借助搅拌、超声等方式);②在填料匀浆的过程中,完成准备工作,即把色谱柱接在匀浆罐的下端(色谱柱不接匀浆罐的一段要接好筛板和柱头,确保拧紧但不能拧死以免损坏色谱柱),打开匀浆罐上端和气泵之间的接头以便灌入匀浆液;③匀浆液罐好后,接好匀浆罐上端接头,开始加压;④选择合适的压力,就可以把填料压实了;⑤稳定在适当的压力上压一定时间后,卸掉压力,卸下色谱柱,把接匀浆罐这一段的填料抹平,装上筛板和柱头即可使用。
3. 装柱是个困难的过程,需要耐心摸索压力、匀浆液体积等参数,才能确保柱床均匀密实,达到**柱效和峰形。如果装的不好,则可能出现柱效不够,或拖尾等问题。
高效液相色谱柱的选择:
看你的流动相而定。
正相和反相是根据固定相和流动相的极性差异定义的。正相是固定相极性大,反相是流动相极性大,而样品的分离情况与极性直接关联。
像氰基柱和氨基柱,都是正相反相都可以用,主要区分是根据你的流动相。如果你的流动相中是水、甲醇、乙腈这些东西,那肯定是反相的。如果是正己烷、乙醇、四氢呋喃这些东西作为流动相,那基本就是正相的。
个人建议,使用反相色谱柱,不要使用正相的流动相。
第一:你色谱柱的填料不同,跑出来的色谱峰可能*不同。检测方法不可取。
第二:反相色谱柱冲入像是四氢呋喃这类的物质,很有可能导致填料坍塌。
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