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苹果醋中展青霉素含量检测的固相萃取方法

发布时间:2022-01-04      点击次数:199

展青霉素又称展青霉毒素、棒曲霉素、珊瑚青霉毒素,它是一由曲霉和青霉等真菌产生的一种次级代谢产物,棒曲霉素具有广谱的抗生素特点。展青霉素是一种世界范围内的水果污染物,在多种水果、水果制品和果酒中均有发现,对人及动物具有较强的毒性作用。当人摄取了展青霉素,可通过影响细胞膜的透过性间接地引起生理呼吸异常。鉴于展青霉素的毒性及其污染情况,开展展青霉素的检测非常必要。

中检维康研发的Clover- SepMyco 228多功能固相净化柱,展青霉素固相净化柱,该方法符合GB 5009.185-2016 食品安全国家标准 食品中展青霉素的测定,操作简便快捷,与国内外的其他产品相比,具有回收率高,净化效果好等优点

操作方法如下:


Clover- SepMyco 228多功能固相净化柱

高效液相色谱法(HPLC)检测展青霉素

参考标准

²  GB 5009.185-2016 食品安全国家标准 食品中展青霉素的测定

试剂配制

²  乙酸溶液:10mL乙酸加入250mL,混匀。

²  果胶酶(液体):活性 1500U / g , 2~8 避光保存。(P/N: Clover 228-01)

样品提取

                                                                                                       

²  液体试样(苹果汁、山楂汁等)

称取4g试样(准确至0.01g)50mL离心管中,加入21mL乙腈,混合均匀,6000r/min下离心5min,待净化。

²  固体、半流体试样(山楂片、果丹皮、苹果果泥、苹果果酱、带果粒果汁等)

称取1g试样(准确至0.01g)50mL离心管中,再加入10mL水与150μL果胶酶溶液混匀,室温下避光放置过夜后,加入10.0mL乙酸乙酯,涡旋 混合5min,6000r/min下离心5min,移取乙酸乙酯层至梨形烧瓶。再用10.0mL乙酸乙酯提取一次,合并两次乙酸乙酯提取液,40水浴中用旋转蒸发仪浓缩至干,2.0mL乙酸溶液溶解残留物, 再加入8mL乙腈,混匀后待净化。

样品净化

将提取液通过净化柱净化,弃去初始的1mL净化液,收集后续部分。用吸量管准确吸取5.0mL净化液,加入20μL乙酸,40下用氮气缓缓地吹至近干,加入乙酸溶液定容至1mL,涡旋30s溶解残渣,0.22μm 滤膜,收集滤液于进样瓶中以备进样。

液相色谱条件

²  色谱柱:Cloversil-C18 4.6*150mm5um)或4.6*250mm5um

²  流动相:乙腈-水(5+95v/v)或甲醇-水(10+90v/v

²  流速:0.8mL/min

²  检测器:紫外检测器,波长276nm

²  进样体积:20~100uL

²  柱温:40

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