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奶粉中维生素B12试剂盒检测方法及注意事项

发布时间:2023-01-06      点击次数:121

简介:

维生素B12又叫钴胺素,是维一含金属元素的维生素。自然界中的维生素B12都是微生物合成的,高等动植物不能制造维生素B12。维生素B12是维一的一种需要一种肠道分泌物(内源因子)帮助才能被吸收的维生素。有的人由于肠胃异常,缺乏这种内源因子,即使膳食中来源充足也会患恶性贫血。植物性食物中基本上没有维生素B12。它在肠道内停留时间长,大约需要三小时(大多数水溶性维生素只需要几秒钟)才能被吸收。维生素B12的主要生理功能是参与制造骨髓红细胞,防止恶性贫血;防止大脑神经受到破坏。

原理:

CLOVER VB12试剂盒的测定是基于免疫学中抗原抗体特异性反应的原理而建立的。微孔板包被有VB12抗原。加入VB12抗体和VB12标准品或样品提取液。标准品或样品中提取的VB12能与酶标板上的VB12包被原竞争性地结合定量的抗体,没有结合的抗体、标准品或样品中提取的VB12在洗涤步骤中被除去。再加入酶标二抗与微孔中的VB12抗体反应。洗涤除去没有反应的酶标二抗。加入底物溶液温育,酶标记物将无色的显色剂转化为蓝色的产物,加入终止液后颜色由蓝色转变为黄色,在450nm 处测量每孔的OD值。OD值与样品中的维生素B12含量成反比。

 

奶粉前处理:

1)         称取1.0g奶粉样品于50mL离心管中,加入9mL 50℃纯净水溶解,即位复原乳样品。

2)         1mL复原乳样品到1mL离心管中,4 3000r/min离心10分钟。

3)         去除上层脂肪层,转移出100μL中层奶液至一洁净的离心管中,加入稀释缓冲液500μL,涡旋混匀待检(1 份上层液+5份稀释液)。

4)         50μL 进行分析。

试剂盒操作:

1)         取所需量的微孔板条装在酶标板框架上。

2)         分别吸取50μL标准品和样品加至相应的微孔(双孔)中,再各加入50μL的抗体,加盖,室温(25℃)温育30分钟。

3)         倒出孔中的液体,每孔加入250μL稀释好的洗涤液洗涤,重复操作四次。

4)         每孔加入酶标二抗100μL 室温(25℃)温育30分钟。

5)         重复步骤3,反复洗涤四次。

6)         每孔加入100μL显色底物,室温避光温育10分钟。

7)         每孔加入50μL终止液,混匀。

置于酶标仪中,振荡混匀,在450nm处测定吸光度值(OD值),参比波长630nm。(iELisa全自动酶标仪可以直接读出、打印浓度值)

 

注意事项

1)         室温低于20或试剂及样品未回到室温(20- 25)会导致数值偏低。

2)         在洗板过程中如果出现板孔干燥过久的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

3)         标准物质和显色液对光敏感,避免直接暴露在光线下。

4)         混合要均匀,洗板要彻低(包括加样品和标准液的时候都必需充分混合均匀)。

5)         终止液为强酸性物质,避免接触皮肤。

6)         不要使用过了有效期的试剂盒,也不要使用不同批次的试剂盒,这样会引起测定误差。


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