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食品及饲料中伏马毒素的检测-柱前衍生及柱后衍生法

更新时间:2023-12-04      点击次数:427

关于伏马毒素  

   伏马毒素 (Fumonisin FB) 是一种霉菌毒素,是由串珠镰刀菌产生的代谢产物。主要污染粮食及其制品,并对某些家畜产生急性毒性及潜在的致癌性,已成为继黄曲霉毒素之后的又一研究热点。目前我国现行标准《食品安全国家标准食品中真菌毒素XIAN量》(GB2761-2017)尚未涉及伏马毒素的XIAN量,不过在《饲料卫生标准》(GB 13078—2017)规定了部分饲料原料和饲料产品中的FB1和FB2总量的XIAN量标准。其中饲料原料玉米及其加工产品、玉米酒糟类产品、玉米青贮饲料和玉米秸秆中伏马毒素的XIAN量为 60 mg/kg,其他饲料产品中伏马毒素的XIAN量在5~50 mg/kg。

关于检测方法

GB 5009.240-2023 食品安全国家标准 食品中伏马菌素的测定 (将于2024年3月实施)

LS/T 6130-2017 粮油检验 粮食中伏马毒素B1、B2的测定 超高效液相色谱法

本方案采用IAC-107伏马毒素免疫亲和柱

IAC-107伏马毒素免疫亲和柱能够特异性的纯化与浓缩样品中的伏马毒素B1 、B2 、B3 . 伏马毒素免疫亲和柱广泛地应用于粮食、食品、饲料、等样品的提取,该方法速度快、操作简单、准确性高,对准确灵敏的测定样品中的伏马毒素起到十分重要的作用。

操作流程

一、样品前处理

1.样品提取及稀释


1.1 取25.0g(精确到0.1g)过筛样品于均质杯中,加入乙腈水(5+5) 100mL,以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取20min,定量滤纸过滤。


1.2 移取2.0mI滤液加入48mL0.1%的吐温/PBS稀释混匀。


2.样品净化


2.1将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下准确移取50.0mL上述样品溶液注入玻注射器中。

2.2将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约1滴/s的流速缓慢通过免疫亲和柱,直至空气进入亲和柱中。

2.3用10mL水淋洗亲和柱流速为1滴/s~2滴/s.直至空气进入亲和柱中,弃去全部流出液,抽干小柱。

2.4准确加入3mL甲醇-乙酸溶液( 98+2 洗脱流速约为1滴/s,收集洗脱液。50°C下氮气浓缩吹干后,用乙腈水 (5+5) 定容至1 mL,待检测。

二、液相条件及衍生方法

柱前衍生法

色谱柱: Cloversil-C18 4.6*150mm (5um) 或4.6*250mm (5um)

流动相: 甲醇:0.1MNaH2PO4(77: 23 体积比)用磷酸将PH值调到3.3

检测器: 激发波长335nm 发射波长440nm

进样体积: 20uL

衍生方法:取100uL标准溶液或样品净化液于进样瓶中加入100uL OPA衍生试剂A涡旋混合30s,在 2分钟内进样分析。

柱后衍生法

色谱柱: Cloversil-C18 4.6*150mm (5um) 或4.6*250mm (5um)

流动相: 甲醇/(65+35)

检测器:激发波长335nm发射波长440mm

进样体积: 20uL

衍生泵流速: 0.4mL/min

衍生温度: 50℃

衍生泵流动相: OPA行生试剂B

图片  

HP-L10柱后衍生系统  

图片

HP-L20柱后衍生系统

实验结果

1、效回收:



图片

2、样品添加回收:取玉米样品,伏马B1B2B3混标添加各1000ppb

图片

3、标准品及样品图谱

图片

1  柱前衍生标准品液相色谱图(出峰顺序B1,B3,B2)

图片

2  柱后衍生标准品液相色谱图(出峰顺序B1,B3,B2)

图片


3  玉米本底液相色谱图
图片      图4  玉米加标液相色谱图
订购信息
本方案所需要的产品及仪器见下表


C/N编号

物品

HP-L10

HP-L20

CLOVER柱后衍生装置

C1015

邻苯二甲醛 (HPLC 法用)

C1016

2-疏基乙醇(HPLC 法用)

ZJ0612

科乐福 CLOVER 多位位泵流操作架(配有1台空气泵,610mL 针简)

20202

高速匀质器,转速可达 18.000 r/in~22.000 r/min

31955-C

科乐福 CLOVER微纤维滤纸   (1.5um100 /)

31240-C

折叠式槽纹滤纸 (100 /),或中速定性滤纸

36010-C

一次性塑料烧杯(25/)

34000-C

一次性无荧光测试管(250 /)

36020-C

塑料漏斗(10 /)

CLOVER-1ST7224/5/6

伏马毒素标准品 B1/B2/B3

35016

色谱纯级的甲醇(4/)

C546150-U

科乐福 Cloversil C18 反相色谱柱 4.6*150mm (5um)

C546250-U

科乐福 Cloversil C18 反相色谱柱 4.6*250mm (5um)

FCMF3-CCP320C

玉米、饲料等基质含有不同水平伏马毒素的质控样品(FAPAS/Trilogy)



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