GB31658.17-2021多兽残处理方案可供参考

　　2022年最新版食品安全抽检实施细则更新了针对于牛、羊、猪、鸡的肌肉、及肝、肾组织中部分四环素类、磺胺类和喹诺酮类的检测方法——《GB31658.17-2021动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》，中检维康参照该标准进行试验，并优化了部分参数，建立了一份具有良好回收率及稳定性，能满足国标要求的 SPE-HPLC-MS/MS 方法，可供参考。
 

　　1.样品提取
 

　　准确称取粉碎均匀的肉类样品1g(精确至 0.01 g)于干净离心管中，加入8 mL Mcllvaine-Na2EDTA 溶液，涡旋混匀后超声提取 20 min，-5℃下 120000 r/min 离心 5 min，取出上清液于另一干净离心管，试样残
 

　　渣加入 8 mL 磷酸盐缓冲液，同上述操作，合并两次提取液，-5℃下 120000 r/min 离心 5 min，上清液待净化。
 

　　Mcllvaine-Na2EDTA 缓冲液：取柠檬酸·一水 12.9g、磷酸氢二钠·十二水 10.9g、乙二胺四乙酸二钠·二水 39.2g,加水 900mL,用 1mol/L 的氢氧化钠溶液调节 pH 至 5.0±0.2，用水稀释至 1000mL。
 

　　磷酸盐缓冲液：取 0.05 mol/L 磷酸二氢钠溶液 190 mL,用 0.05 mol/L 磷酸氢二钠溶液稀释至 1000mL。
 

　　2.样品净化
 

　　活化：固相萃取柱依次用 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化。（Clover HLB,200mg/6mL）
 

　　上样：取上述待净化液加入活化好的固相萃取柱中。
 

　　淋洗：依次用 5 mL 水，5 mL 5%甲醇-水溶液，抽干。
 

　　洗脱：用 8 mL 甲醇：乙酸乙酯：氨水=50:50:2 溶液进行洗脱。
 

　　收集全部洗脱液，45℃下氮吹至 100 μL 左右，加入 0.1%甲酸溶液定容至1mL,过 PTFE 亲水滤膜，上机测试。
 

　　3.基质标准曲线溶液的制备
 

　　取 6 个空白基质样品同正常样品一样操作，收集洗脱液后，于洗脱液中分别加入适量标液，再与其他样品洗脱液一同氮吹，定容，使最终上机溶液的浓度分别为 2 μg/L、10 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L、500 μg/L。
 

　　4.仪器条件
 

　　(1)色谱条件
 

　　仪器：UPLC-MS/MS(Thermo Fisher TSQ Endura)
 

　　色谱柱：Hypersil GOLD C18 (2.1 mm×100 mm，1.9 μm)
 

　　流动相：A：水(0.1 %甲酸) B：甲醇：乙腈=2:8(0.1 %甲酸)
 

　　洗脱方式：梯度洗脱，见表 1
 

　　流速：0.3 mL/min
 

　　柱温：35℃
 

　　进样量：10 μL

 

　　(2)质谱条件
 

　　子源：HESI
 

　　电喷雾电压：3500 V
 

　　鞘气压力：40 arb
 

　　辅气压力：2 arb
 

　　离子传输管：380 ℃
 

　　辅气温度：350 ℃

 

　　5.实验结果

 

　　图1 添加水平为100.0 μg/kg 时猪肉中兽残的总离子流图

 

　　图2 添加水平为100.0 μg/kg 时鸡肉中兽残的总离子流图
 

　　优化 Tips：
 

　　1.在提取过程中降低离心的温度至-5℃可以更好的抑制样品中的脂肪在水溶液表面的分散，有利于样品的提取转移。
 

　　2.在超声提取完合并两次的提取液之后，再进行一次离心，更好的去除基质的影响，便于上样过柱。
 

　　3.在淋洗过程中使用 5 mL 5%甲醇-水溶液淋洗液，可以减少在淋洗过程中部分目标物的损失。
 

　　4.标准中氮吹至 100 μL 左右，不氮吹干可以减少在氮吹过程中部分目标化合物的损失。
 

　　5.复溶时，加入 0.1%甲酸溶液定容至 1 mL,可以有效的改善部分目标化合物的峰型，同时提高部分化合物的回收率。6.为了改善上样后的流速问题，使用  Clover ® HLB( 货号：HLB2006-M)较普通的 HLB 净化柱可以获得更好的流速。
 

　　6.订购信息