免疫亲和柱是一种基于抗原-抗体特异性结合原理的分离纯化技术工具,其核心在于利用抗体对特定抗原的高亲和力,实现目标分子从复杂混合物中的选择性富集、纯化或检测。
免疫亲和柱的工作原理基于抗原-抗体之间的特异性结合。当含有目标分子的混合物流经免疫亲和柱时,目标分子会与柱内固定的抗体结合,形成免疫复合物,从而被保留在柱内。而其他非目标分子则不会与抗体结合,直接穿透柱子或被适宜的溶液洗脱。通过改变缓冲液的pH值、离子强度或添加竞争性配体,可以使目标分子从抗体上解离下来,从而实现目标分子的纯化和分离。
免疫亲和柱通常由以下几部分组成:
柱管:用于容纳固定相和样品溶液,常见规格有1ml和3ml等,不同规格对应不同的柱容量。
固定相:一般采用琼脂糖凝胶、聚丙烯微球或磁珠等作为基质,表面经活化处理形成活性基团,用于固定抗体。
抗体:通过化学偶联法固定在固定相上,是免疫亲和柱的核心成分,决定了柱子的特异性和选择性。
上下筛板:采用聚丙烯材质多孔筛板,孔径在0.5-10μm之间,用于实现均匀流体分布,防止固定相流失。
连接组件:包含标准鲁尔接口或螺纹接头,可适配实验室常规层析系统,方便实验操作。
使用注意事项
样品处理:上样溶液应保持酸碱中性、无悬浮物,甲醇浓度不宜过高,以免影响抗体的活性和柱子的性能。
流速控制:上样及洗脱速度要慢且均匀,一般控制在每秒1-2滴,以确保目标分子与抗体充分结合和解离。
温度控制:实验环境温度可以保持在室温24℃-28℃,太高或太低的温度都会对亲和柱的回收率产生一定影响。
储存条件:免疫亲和柱在使用前应在4-8℃环境下保存,使用前需恢复至室温再进行实验。不要在无水状态下保存,否则琼脂容易干燥,影响亲和柱的质量。
保质期:免疫亲和柱的保质期一般为1.5年,储存条件为4℃-8℃,切忌0℃以下的低温保存。