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亲和柱使用要点分析

更新时间:2024-01-09      点击次数:143
  亲和柱原理
 
  样品经提取液提取、过滤、稀释,然后通过键合有特殊抗体的免疫亲和柱。此时,分析目标物被亲和柱中的抗体特异性的吸附,用水或缓冲液将免疫亲和柱上的杂质除去,然后用甲醇使抗体变性,从而将目标物从亲和柱上洗脱下来。之后,用检测仪器进行定量检测。
 
  亲和柱使用要点:
 
  1、上柱的样品溶液应该保持酸碱中性、若偏酸或偏碱,可用PBS稀释调节;
 
  2、样品添加回收试验时,标准品添加到样品中,静置2小时后或过夜,再进行样品前处理,否则会出现回收率偏低的现象。
 
  3、亲和柱样品过柱洗脱速度要慢且均匀,约每秒1-2滴;
 
  4、注意亲和柱的柱容量,若超过柱容量,上柱前请稀释;
 
  5、如果将标准品直接过柱验证回收率时,一定要确保标准上柱液中有机浓度不要超过25%,否则会影响柱子的吸附能力。
 
  6、储存条件为4℃-8℃。切记0℃以下的低温,因为缓冲液冻结,会严重影响亲和柱内的物理结构,对质量影响很大,同时注意柱内保护液面,若泄露导致琼脂干燥萎,请勿使用;
 
  7、试验中使用的玻璃仪器等,一定要清洗干净,尤其是用次氯酸等处理过的仪器,否则会使检测结果偏低。
 

 

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