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中检维康iELisaT-2毒素检测试剂盒

简要描述:中检维康iELisaT-2毒素检测试剂盒
测定的基础是抗原-抗体反应。微孔板上包被有偶联抗原。分别加入T2毒素标准品或样品、酶标记物和抗体于微孔中,样品/标准品竞争结合抗体,酶标记物可与一抗结合,再于酶标版上的包被抗原结合。反应洗涤后,加入TMB底物显蓝色,加入终止液后颜色由蓝变黄,用酶标仪在450nm处检测,吸光值与样品中T2毒素含量成负相关,与标准曲线比较即可得出T2毒素的含量。

  • 产品型号:CE107,96T
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-11-20
  • 访  问  量:240

详细介绍

品牌科乐福clover产地类别进口
应用领域环保,食品,生物产业,农业,制药

 中检维康iELisaT-2毒素检测试剂盒

  1. 概要

T2毒素(T2)是由多种镰刀菌产生的一种霉菌毒素。主要污染小麦、大麦、玉米等粮食作物及其制品,对人类健康及畜牧业构成了较大危害。T-2毒素主要影响血液,肝脏,肾脏,胰腺肌肉及淋巴细胞的功能,T-2毒素中毒后的一般临床症状为厌食、呕吐、腹泻、生长停滞、繁殖和神经机能障碍等。使用T2毒素试剂盒则能够快速而准确的分析样品中T2毒素残留。

  1. 原理

测定的基础是抗原-抗体反应。微孔板上包被有偶联抗原。分别加入T2毒素标准品或样品、酶标记物和抗体于微孔中,样品/标准品竞争结合抗体,酶标记物可与一抗结合,再于酶标版上的包被抗原结合。反应洗涤后,加入TMB底物显蓝色,加入终止液后颜色由蓝变黄,用酶标仪在450nm处检测,吸光值与样品中T2毒素含量成负相关,与标准曲线比较即可得出T2毒素的含量。

  1. 试剂盒的组成
  1. 包被有抗原的96微孔板:1块(96 孔,12×8 孔)
  2. T2毒素标准品:0ng/mL0.5ng/mL 1.0ng/mL2.0ng/mL5.0ng/mL20ng/mL                        1 × 1.0mL
  3. T2抗体                      1 ×10mL
  4. 酶标记物                    1 ×10mL
  5. 10× 浓缩洗涤液:            1 × 50mL
  6. T2稀释缓冲液A             1 × 50mL
  7. T2稀释缓冲液B             1 × 50mL
  8. 显色底物TMB              1 × 17mL
  9. 终止液:                     1 × 7mL
  10. 试剂盒说明书:               1
  11. 质检报告:                   1
  1. 需要的仪器、试剂

1)仪器   

  1. 酶标仪450nmiELisa全自动酶标仪或相当者)
  2. 微量移液器:20μL-200μL单道,100μL-1000μL单道, 50μL-300μL八道
  3. 多功能旋转混合器(或者摇床、高速均质器)
  4. 酶标板振荡器
  5. 涡旋混合器
  6. 50mL离心管
  7. 1.5mL离心管
  8. 定性滤纸
  9. 过滤漏斗
  10. 天平:感量0.01g
  1. 试剂
  1. 样品提取液70%甲醇:取700mL甲醇,加300mL纯水,混匀。
  1. 样品处理

5.1谷物(玉米、小麦、高粱、大米、大豆):

  1. 称取5.0g粉碎样品于50mL离心管中,加入25.0mL样品提取液70%甲醇,置于多功能旋转混合器上振荡30分钟(或使用高速均质器均质3分钟,或摇床上振荡40分钟)。
  2. 将提取液用普通滤纸过滤,吸取100μL滤液置于1.5mL离心管中,加入900μL T2稀释缓冲液A,用涡旋混合器混匀

稀释倍数:50

5.2饲料:

  1. 称取5.0g粉碎样品于50mL离心管中,加入25.0mL样品提取液70%甲醇,置于多功能旋转混合器上振荡30分钟(或使用高速均质器均质3分钟,或摇床上振荡40分钟)。
  2. 将提取液用普通滤纸过滤,用0.22μm有机系滤膜过滤后,100μL滤液置于1.5mL离心管中,加入900uL T2稀释缓冲液B,用涡旋混合器混匀

稀释倍数:50

6 酶联免疫分析程序

6.1测定之前注意事项

  1. 使用前将所有试剂平衡至室温(20-25
  2. 使用后迅速将试剂放入2-8冷藏。
  3. ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
  4. 所有温育过程应避免阳光直射,并按要求用盖板覆盖住酶标板。

6.2溶液的配制

  1. 提取液的配制: 根据实验所需的量配制70%的甲醇水溶液(水要用纯水、或蒸馏水、去离子水)
  2. 洗涤液的配制:将浓缩洗涤液用纯水稀释10倍后使用。(例如:取10 mL 浓缩液+90 mL纯水, 可以用于32孔的检测)。

6.3测定程序

  1. 将足够标准品和样品所用数量的孔条插入酶标板架,标准品和样品做两个平行实验,记录下标准和样品的位置。未使用的酶标板用铝箔袋封好置2-8冷藏保存。
  2. 分别吸取50μL标准品和样品加至相应的微孔(双孔)中,然后再各加入50μL的酶标记物,后加入50μLT2抗体,装入袋中密封,室温(25℃)温育20分钟。
  3. 倒出孔中的液体,每孔加入250μL稀释好的洗涤液洗涤,重复操作四次。洗板时每次间隔30s,洗完后用力在吸水纸上排干。
  4. 每孔加入100μL显色底物,避光室温(25℃)温育10分钟。
  5. 每孔加入50μL终止液,混匀。
  6. 置于酶标仪中,振荡混匀,在450nm处测定吸光度值(OD值),参比波长630nm。(iELisa全自动酶标仪可以直接读出、打印浓度值)。

7.  结果判定

1)所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值(B)除以DI个标准(0标准)的吸光度值(B<苏b>0)再乘以100%,即百分吸光度值。

 

百分吸光度值(%)=

B

×100%

B<苏b>0

T2毒素标准品浓度值(ppb)为X轴,百分吸光度值为Y轴,绘制标准曲线图。相对应每一个样品的浓度可以从标准曲线上读出。也可以用回归方程法,计算出样本溶液浓度。利用计算机专业软件,更便于大量样品的快速分析。

  1. 样品的实际浓度为读数结果乘以相应稀释倍数。
  2. 如果测定值超出检测范围,样品提取溶液按一定的比例用70%甲醇进行稀释。

8.  注意事项

  1. 室温低于20或试剂及样品未回到室温(20- 25)会导致数值偏低。
  2. 在洗板过程中如果出现板孔干燥过久的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。
  3. 标准物质和显色液对光敏感,避免直接暴露在光线下。
  4. 混合要均匀,洗板要彻底(包括加样品和标准液的时候都必需充分混合均匀)。
  5. 终止液为强酸性物质,避免接触皮肤。
  6. 不要使用过了有效期的试剂盒,也不要混合使用不同批次的试剂盒,这样会引起测定结果不准确。
  7. 试剂盒的储存条件是2-8,切勿冷冻。

9.  中检维康iELisaT-2毒素检测试剂盒的性能指标

  1. 检测限LOD: 谷物10ppb(μg/kg),饲料15ppb,(LOD:空白样品测定值+2倍标准偏差SD
  2. 定量限LOQ: 谷物25ppb,饲料30ppb
  3. 定量检测范围:谷物25-1000ppb,饲料30-1000ppb

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