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黄曲霉毒素亲和柱操作步骤简介

发布时间:2022-02-14      点击次数:407
  黄曲霉毒素(Aflatoxin,AF)是食品中产泛存在的一种高致癌性真菌毒素,是Asperilus flavus和Asperillus parasiticus的二次代谢产物,黄曲霉毒素M1(Aflatoxin M1,AFM1)是动物摄入黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)后在体内经羟基化而形成的产物,主要存在于动物的可食部分,如乳、肝、蛋类等,其中以乳形态较为常见。是到目前为止所发现的毒性较大的真菌毒素。它可通过多种途径污染食品和饲料,直接或间接进入人类食物链,威胁人类健康和生命安全,对人体及动物内脏器官尤其是肝脏损害严重,该毒素是黄曲霉和寄生曲霉中产毒菌株的代谢产物,普遍存在于霉变的粮食及粮食制品中。鉴于黄曲霉毒素对人类的巨大危害性,我国对其在食品中的含量作了严格规定,其中,乳制品中黄曲霉毒素允许量为5ug/kg(即5ppb)。
  黄曲霉毒素亲和柱的功能基于抗原与抗体间可逆的特异性结合反应,使其可从复杂样品基质中特异性地回收目标化合物。上样后,柱中以共价键形式偶联在凝胶上的抗体会与抗原(即目标化合物)特异性结合,杂质不会被结合,大部分随样品溶液流出小柱。通过淋洗的方式除去小柱内剩余杂质后,使用纯甲醇或其他洗脱液(根据对应产品说明书选择)进行洗脱即可得到洁净的目标化合物溶液,可直接用于后续检测。
  黄曲霉毒素亲和柱操作步骤简介:不同标准样品的提取不太一样,以国标 GB/T5009.22-2016 方法固体样品为例
  1.提取样品:粉碎、称重5g样品;用甲醇/水(70/30V/V)混合物将样品高速混匀3分钟。
  2.过滤:将提取的样品槽纹滤纸或普通滤纸过滤。准确移取 8.0mL 滤液并加入 42.0mL1%Tween-20 PBS 或1%TritionX-100PBS 稀释,用玻璃纤维滤纸过滤,至滤液澄清,量取 25mL滤液备用。
  3.吸附、淋洗:将免疫亲和柱连接于 50.0mL 玻璃注射器下。准确将处理好的样品滤液注入玻璃注射器中, 调节下滴速度,控制样液以 1mL / min~3mL / min 的速度稳定下滴。待样液滴完后(注:不要用空气吹出残留的液体,防止下一步出现堵柱子的现象) ,往注射器筒内加入 2× 10mL 水,以 2mL / min~4mL /min 稳定流速淋洗免疫亲和柱。待水滴完后,用真空泵抽干亲和柱。 准确加入 1.0mL 色谱级甲醇洗脱, 流速为 1mL/min~2mL/min(1 滴/秒),收集全部洗脱液于玻璃试管中。并收集于HPLC进样小瓶中。
  4.测定:HPLC直接进样,在经过柱分离后,被UVD光化学衍衍生器衍生化,被荧光检测器记录各种黄曲霉毒素的浓度。



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