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柱前衍生及柱后衍生法

更新时间:2024-01-04      点击次数:492
 关于检测方法✦

GB 5009.240-2023 食品安全国家标准 食品中伏马菌素的测定 (将于2024年3月实施)

LS/T 6130-2017 粮油检验 粮食中伏马毒素B1、B2的测定 超高效液相色谱法

 

IAC-107伏马毒素免疫亲和柱能够特异性的纯化与浓缩样品中的伏马毒素B1 、B2 、B3 . 伏马毒素免疫亲和柱广泛地应用于粮食、食品、饲料、等样品的提取,该方法速度快、操作简单、准确性高,对准确灵敏的测定样品中的伏马毒素起到重要的作用。
✦ 操作流程✦

一、样品前处理

1.样品提取及稀释

1.1 称取25.0g(精确到0.1g)过筛样品于均质杯中,加入乙腈水(5+5) 100mL,以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取20min,定量滤纸过滤。 
1.2 移取2.0mI滤液加入48mL0.1%的吐温/PBS稀释混匀。

2.样品净化
2.1将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下准确移取50.0mL上述样品溶液注入玻璃注射器中。

2.2将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约1滴/s的流速缓慢通过免疫亲和柱,直至空气进入亲和柱中。

2.3用10mL水淋洗亲和柱流速为1滴/s~2滴/s.直至空气进入亲和柱中,弃去全部流出液,抽干小柱。

2.4准确加入3mL甲醇-乙酸溶液( 98+2 洗脱流速约为1滴/s,收集洗脱液。50°C下氮气浓缩吹干后,用乙腈水 (5+5) 定容至1 mL,待检测。

二、液相条件及衍生方法

柱前衍生法

色谱柱: Cloversil-C18 4.6*150mm (5um) 或4.6*250mm (5um)

流动相: 甲醇:0.1MNaH2PO4(77: 23 体积比)用磷酸将PH值调到3.3

检测器: 激发波长335nm 发射波长440nm

进样体积: 20uL

衍生方法:取100uL标准溶液或样品净化液于进样瓶中加入100uL OPA衍生试剂A涡旋混合30s,在 2分钟内进样分析。

柱后衍生法

色谱柱: Cloversil-C18 4.6*150mm (5um) 或4.6*250mm (5um)

流动相: 甲醇/(65+35)

检测器:激发波长335nm发射波长440mm

进样体积: 20uL

衍生泵流速: 0.4mL/min

衍生温度: 50℃

衍生泵流动相: OPA行生试剂B 
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