中检维康iELisa 黄曲霉毒素总量试剂盒

 中检维康iELisa 黄曲霉毒素总量试剂盒

1. 概要

黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉的有毒的代谢产物，主要存在于谷物、坚果和饲料中。1993年黄曲霉毒素B1被世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构划定为Ⅰ类致癌物，是一类毒性*的剧毒物质。它被证明对人和动物的肝脏、肾脏等组织和器官具有很大的危害。中国标准规定：黄曲霉毒素B1在玉米、大米、小麦中*分别不得超过20、10、5μg/kg，各种饲料中黄曲霉毒素B1的*为10-50μg/kg。黄曲霉毒素总量试剂盒不仅可以对黄曲霉毒素B1，而且可以对其他黄曲霉毒素（B2、G1、G2）进行全面的检测。

1. 原理

测定的基础是抗原-抗体反应。微孔板上包被有抗抗体。加入黄曲霉毒素标准品或样品、酶标抗原和抗体后，游离的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2与酶标抗原竞争结合抗体，抗体或抗体结合物与固定在微孔板上的抗抗体再结合，没有结合的标准品、酶标抗原及抗体被洗去，加入TMB底物显蓝色，加入终止液后颜色由蓝变黄，用酶标仪在450nm处检测，吸光值与样品中黄曲霉毒素总量含量成负相关，与标准曲线比较即可得出黄曲霉毒素总量的含量。

1. 试剂盒的组成

1. 包被有抗抗体的96微孔板：1块（96 孔，12 条×8 孔）
2. AFT 标准品：0 ng/mL、 0.25ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL           1 瓶 × 1.0mL
3. AFT酶标抗原：               1 瓶 × 10mL
4. AFT抗体：                   1 瓶 × 10mL
5. 10× 浓缩洗涤液：             1 瓶 × 50mL
6. AFT稀释缓冲液A：           1 瓶 × 50mL
7. AFT稀释缓冲液B：           1 瓶 × 50mL
8. 显色底物TMB：              1 瓶 × 17mL
9. 终止液：                     1 瓶 × 7mL
10. 试剂盒说明书：               1份
11. 质检报告：                   1份

1. 需要的仪器、试剂

1）仪器  

1. 酶标仪450nm（iELisa全自动酶标仪或相当者）
2. 微量移液器：20μL-200μL单道，100μL-1000μL单道, 50μL-300μL八道
3. 多功能旋转混合器（或者摇床、高速均质器）
4. 酶标板振荡器
5. 涡旋混合器
6. 氮气吹干仪
7. 50mL离心管
8. 1.5mL离心管
9. 离心机
10. 定性滤纸
11. 过滤漏斗
12. 天平：感量0.01g

1. 试剂

1. 样品提取液70%甲醇：取700mL甲醇，加300mL纯水，混匀。
2. 纯水（蒸馏水、去离子水）、正己烷、三氯甲烷、甲醇
3. 8.  注意事项
4. 室温低于20℃或试剂及样品未回到室温（20- 25℃）会导致数值偏低。
5. 在洗板过程中如果出现板孔干燥过久的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。
6. 标准物质和显色液对光敏感，避免直接暴露在光线下。
7. 混合要均匀，洗板要*（包括加样品和标准液的时候都必需充分混合均匀）。
8. 终止液为强酸性物质，避免接触皮肤。
9. 不要使用过了有效期的试剂盒，也不要混合使用不同批次的试剂盒，这样会引起测定结果不准确。
10. 试剂盒的储存条件是2-8℃，切勿冷冻。

11. 9.  中检维康iELisa 黄曲霉毒素总量试剂盒的性能指标

12. 检测限LOD: 谷物1.5ppb(μg/kg)，饲料4.0ppb，植物油1.5ppb(μg/kg)，酱油、醋1.5ppb(μg/kg)，糕点1.5ppb(μg/kg)，酒类1.5ppb(μg/kg),发酵液3.5ppb。（LOD：空白样品测定值+2倍标准偏差SD）
13. 定量限LOQ: 谷物3.0ppb，饲料7.5ppb，植物油2.5ppb(μg/kg)，酱油、醋2.5ppb(μg/kg)，糕点2.5ppb(μg/kg)，酒类3.0ppb，发酵液6ppb。
14. 定量检测范围：谷物3.0-25ppb，饲料7.5-60ppb，植物油2.5-20ppb，酱油、醋2.5-20ppb，糕点2.5-20ppb，酒类3.0-25ppb,发酵液6.0-50ppb。
15.