产品分类
Product Category详细介绍
品牌 | clover/科乐福 | 供货周期 | 现货 |
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应用领域 | 医疗卫生,食品,化工,烟草,制药 |
IAC-SEP®赭曲霉毒素A免疫亲和柱
(产品编号:IAC105)
使用对象
赭曲霉毒素A免疫亲和柱能够特异性的纯化与浓缩样品中的赭曲霉毒素A。赭曲霉毒素A免疫亲和柱广泛地应用于粮食、饲料、大豆、油菜籽、植物油、酱油、醋、酱及酱制品和酒类等样品的提取,该方法速度快、操作简单、准确性高,对准确灵敏的测定样品中的赭曲霉毒素A起到十分重要的作用。
适用于以下标准:
GB/T 23502-2009 食品中玉赭曲霉毒素A的测定-免疫亲和层析净化高效液相色谱法
SN/T 1746-2006 进出口大豆、油菜籽和食用植物油中赭曲霉毒素A的检测方法
原理
样品经甲醇+水提取液提取、过滤、稀释,然后通过键合有赭曲霉毒素A特殊抗体的免疫亲和柱。此时,赭曲霉毒素A被亲和柱中的抗体特异性的吸附,用水或缓冲液将免疫亲和柱上的杂质除去,然后用甲醇使抗体变性,从而将赭曲霉毒素A从亲和柱上洗脱下来。后,用HPLC或荧光计进行定量检测。
储存条件
该亲和柱保存在2-8 °C条件下,不能冷冻,保质期为18个月。建议在室温(18-30°C)下使用。
实验溶液制备
提取液1,甲醇/水(8+2):取80mL甲醇加20mL水,混合均匀。
提取液2,称取150g氯化钠,20g碳酸氢钠溶于900mL水中,用水定容至1L
HPLC流动相,乙腈/水/乙酸(99+99+2):取495mL乙腈和10mL乙酸于1L容量瓶中,用纯水定容至1L,用0.22微米的尼龙筛过滤。
标准溶液的配制:取赭曲霉毒素A标准储备液,流动相为稀释液,配制标准品溶液。例如:取100uL标准品储备液10ug/mL于10mL容量瓶中,用流动相定容至10mL,那么,赭曲霉毒素A标准品浓度为100ng/mL
注:配制好的标准品溶液有效期为7天。
冲洗液:称取25g氯化钠,5g碳酸氢钠溶于900mL水中,用水定容至1L
真菌毒素清洗缓冲液:称取25g氯化钠,5g碳酸氢钠溶于900mL水中,加入0.1mL吐温-20,用水定容至1L
pH 7.0 PBS溶液:称取8.0g氯化钠,1.44g磷酸氢二钠,0.24g磷酸二氢钾,0.2gKCL,用990mL纯水溶解,然后用浓盐酸调节pH值至7.0,后用纯水稀释至1000mL。
液相色谱条件
色谱柱:Cloversil-C18 4.6*150mm(5um)
流动相:乙腈/水/乙酸(99+99+2)
流速:0.8mL/min
检测器:荧光检测器,激发波长333nm,发射波长477nm
进样体积:20~100uL
分析步骤
赭曲霉毒素免疫亲和柱的柱容量(大吸附赭曲霉毒素)为100ng,当样品中赭曲霉毒素A超过测定范围时,请适当减小上柱体积,使其在检测范围内,计算出准确含量。
谷物、粮食、大豆、油菜籽、植物油等样品:(测定范围0-250μg/kg) 称取20g磨细的样品,5g 氯化钠;置于250mL具塞锥形瓶中,或匀质杯中。加入100mL甲醇/水(8+2)溶液。以均质器高速匀质提取2min。取下盖子,将提取物到入槽纹滤纸上,滤液收集于干净的容器中。移取10 mL上步的滤液,置于干净的容器中。用40 mL纯水稀释,混匀。将上步稀释液通过玻璃微纤维过滤器,滤液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL准备上柱净化。
饲料,辣椒样品:(测定范围0-400μg/kg)称取25g磨细的样品,5g 氯化钠;置于250mL具塞锥形瓶中,或匀质杯中。加入100mL甲醇/水(8+2)溶液。以均质器高速匀质提取2min。取下盖子,将提取物到入槽纹滤纸上,滤液收集于干净的容器中。移取5 mL上步的滤液,置于干净的容器中。用45 mL pH 7.0 PBS溶液稀释,混匀。将上步稀释液通过玻璃微纤维过滤器,滤液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL准备上柱净化。
酒类:(测定范围0-62.5μg/kg)称取20g样品(含二氧化碳类酒称取前置于4℃冰箱冷藏30min,然后过滤或超声制样),置于25mL容量瓶中,加入提取液2定容至25mL,摇匀。移取10 mL上步的溶液,置于干净的容器中。用40 mL纯水稀释,混匀。将上步稀释液通过玻璃微纤维过滤器,滤液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL准备上柱净化。
酱油,醋,酱及酱制品:(测定范围0-100μg/kg)称取25g样品,置于50mL容量瓶中,加入甲醇/水(8+2)定容至50mL,超声提取2min。将提取物到入槽纹滤纸上,滤液收集于干净的容器中。移取10 mL上步的滤液,置于干净的容器中。用40 mL纯水稀释,混匀。将上步稀释液通过玻璃微纤维过滤器,滤液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL准备上柱净化。
2) 样品的净化
谷物、粮食、大豆、油菜籽、植物油、饲料、辣椒、酱油,醋,酱及酱制品等样品:将上步10 mL滤液,以1滴/秒的流速全部通过赭曲霉毒素A免疫亲合柱,直至空气进入到亲合柱中。用10 mL真菌毒素清洗液以1-2滴/秒的流速淋洗亲合柱;再用10mL纯水以1-2滴/秒的流速淋洗亲合柱,直至空气进入到亲合柱中。用1.5 mL HPLC级的甲醇以1 滴/秒的流速淋洗亲合柱,将所有样品淋洗液(1.5 mL)收集于玻璃测试管中。将1.5mL淋洗液用1.5mL纯水稀释,混匀,注入HPLC检测;或将1.5mL淋洗液在50℃氮气下吹干,用1mL流动相定容后,混匀,注入HPLC检测。
酒类:将上步10 mL滤液,以1滴/秒的流速全部通过赭曲霉毒素A免疫亲合柱,直至空气进入到亲合柱中。用10 mL冲洗液以1-2滴/秒的流速淋洗亲合柱;再用10mL纯水以1-2滴/秒的流速淋洗亲合柱,直至空气进入到亲合柱中。用1.5 mL HPLC级的甲醇以1 滴/秒的流速淋洗亲合柱,将所有样品淋洗液(1.5 mL)收集于玻璃测试管中。将1.5mL淋洗液用1.5mL纯水稀释,混匀,注入HPLC检测;或将1.5mL淋洗液在50℃氮气下吹干,用1mL流动相定容后,混匀,注入HPLC检测。
IAC-SEP®赭曲霉毒素A免疫亲和柱注意事项
需要准备的设备及试剂
C/N编号 | 物品 |
ZJ0612 | Clover12位泵流操作架(配有1台空气泵,6个10mL针筒) |
20202 | 高速匀质器,转速可达18,000 r/min ~22,000 r/min |
31955 | 美国vicam微纤维滤纸(1.5um,100张/盒) |
31240 | 折叠式槽纹滤纸(100张/盒) |
36010 | 一次性塑料烧杯(25/包) |
34000 | 一次性测试管(250支/包) |
36020 | 塑料漏斗(10 个/包) |
| 赭曲霉毒素A标准品 |
35016 | 色谱纯级的甲醇(4升/瓶) |
| 色谱级乙腈(4升/瓶) |
C546150-U | Cloversil C18 反相色谱柱4.6*150mm(5um) |
C546250-U | Cloversil C18 反相色谱柱4.6*250mm(5um) |
| 玉米、饲料等基质含有不同水平赭曲霉毒素A的质控样品 |
| 真菌毒素清洗液(10×) |
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