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IAC-SEP®赭曲霉毒素A免疫亲和柱

简要描述:IAC-SEP®赭曲霉毒素A免疫亲和柱,能够特异性的纯化与浓缩样品中的赭曲霉毒素A。赭曲霉毒素A免疫亲和柱广泛地应用于粮食、饲料、大豆、油菜籽、植物油、酱油、醋、酱及酱制品和酒类等样品的提取,该方法速度快、操作简单、准确性高,对准确灵敏的测定样品中的赭曲霉毒素A起到十分重要的作用。

  • 产品型号:25支/盒,3ml/1ml
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-11-20
  • 访  问  量:191

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详细介绍

品牌科乐福clover供货周期现货
应用领域医疗卫生,食品,化工,烟草,制药

IAC-SEP®赭曲霉毒素A免疫亲和柱

(产品编号:IAC105

使用对象

赭曲霉毒素A免疫亲和柱能够特异性的纯化与浓缩样品中的赭曲霉毒素A赭曲霉毒素A免疫亲和柱广泛地应用于粮食、饲料、大豆、油菜籽、植物油、酱油、醋、酱及酱制品和酒类等样品的提取,该方法速度快、操作简单、准确性高,对准确灵敏的测定样品中的赭曲霉毒素A起到十分重要的作用。

适用于以下标准:

GB/T 23502-2009 食品中玉赭曲霉毒素A的测定-免疫亲和层析净化高效液相色谱法

SN/T 1746-2006 进出口大豆、油菜籽和食用植物油中赭曲霉毒素A的检测方法

 

原理

样品经甲醇+水提取液提取、过滤、稀释,然后通过键合有赭曲霉毒素A特殊抗体的免疫亲和柱。此时,赭曲霉毒素A被亲和柱中的抗体特异性的吸附,用水或缓冲液将免疫亲和柱上的杂质除去,然后用甲醇使抗体变性,从而将赭曲霉毒素A从亲和柱上洗脱下来。后,用HPLC或荧光计进行定量检测。

储存条件

该亲和柱保存在2-8 °C条件下,不能冷冻,保质期为18个月。建议在室温(18-30°C)下使用

 

实验溶液制备

提取液1,甲醇/水(8+2):取80mL甲醇加20mL水,混合均匀。

提取液2,称取150g氯化钠,20g碳酸氢钠溶于900mL水中,用水定容至1L

 HPLC流动相,乙腈//乙酸(99+99+2):取495mL乙腈和10mL乙酸于1L容量瓶中,用纯水定容至1L,用0.22微米的尼龙筛过滤。

标准溶液的配制:取赭曲霉毒素A标准储备液,流动相为稀释液,配制标准品溶液。例如:取100uL标准品储备液10ug/mL10mL容量瓶中,用流动相定容至10mL,那么,赭曲霉毒素A标准品浓度为100ng/mL              

注:配制好的标准品溶液有效期为7

冲洗液:称取25g氯化钠,5g碳酸氢钠溶于900mL水中,用水定容至1L

真菌毒素清洗缓冲液:称取25g氯化钠,5g碳酸氢钠溶于900mL水中,加入0.1mL吐温-20,用水定容至1L

pH 7.0 PBS溶液:称取8.0g氯化钠,1.44g磷酸氢二钠,0.24g磷酸二氢钾,0.2gKCL,用990mL纯水溶解,然后用浓盐酸调节pH值至7.0,后用纯水稀释至1000mL

 

液相色谱条件

色谱柱:Cloversil-C18 4.6*150mm5um

流动相:乙腈//乙酸(99+99+2

流速:0.8mL/min

检测器:荧光检测器,激发波长333nm,发射波长477nm

进样体积:20~100uL

 

分析步骤

赭曲霉毒素免疫亲和柱的柱容量(大吸附赭曲霉毒素)100ng,当样品中赭曲霉毒素A超过测定范围时,请适当减小上柱体积,使其在检测范围内,计算出准确含量。

 

  1. 样品提取及稀释

谷物、粮食、大豆、油菜籽、植物油等样品:(测定范围0-250μg/kg) 称取20g磨细的样品,5g 氯化钠;置于250mL具塞锥形瓶中,或匀质杯中。加入100mL甲醇/水(8+2)溶液。以均质器高速匀质提取2min。取下盖子,将提取物到入槽纹滤纸上,滤液收集于干净的容器中。移取10 mL上步的滤液,置于干净的容器中。用40 mL纯水稀释,混匀。将上步稀释液通过玻璃微纤维过滤器,滤液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL准备上柱净化。

饲料,辣椒样品:(测定范围0-400μg/kg)称取25g磨细的样品,5g 氯化钠;置于250mL具塞锥形瓶中,或匀质杯中。加入100mL甲醇/水(8+2)溶液。以均质器高速匀质提取2min。取下盖子,将提取物到入槽纹滤纸上,滤液收集于干净的容器中。移取5 mL上步的滤液,置于干净的容器中。用45 mL pH 7.0 PBS溶液稀释,混匀。将上步稀释液通过玻璃微纤维过滤器,滤液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL准备上柱净化。

酒类:(测定范围0-62.5μg/kg)称取20g样品(含二氧化碳类酒称取前置于4℃冰箱冷藏30min,然后过滤或超声制样),置于25mL容量瓶中,加入提取液2定容至25mL,摇匀。移取10 mL上步的溶液,置于干净的容器中。用40 mL纯水稀释,混匀。将上步稀释液通过玻璃微纤维过滤器,滤液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL准备上柱净化。

酱油,醋,酱及酱制品:(测定范围0-100μg/kg)称取25g样品,置于50mL容量瓶中,加入甲醇/水(8+2)定容至50mL,超声提取2min。将提取物到入槽纹滤纸上,滤液收集于干净的容器中。移取10 mL上步的滤液,置于干净的容器中。用40 mL纯水稀释,混匀。将上步稀释液通过玻璃微纤维过滤器,滤液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL准备上柱净化。

2) 样品的净化

谷物、粮食、大豆、油菜籽、植物油、饲料、辣椒、酱油,醋,酱及酱制品等样品:将上步10 mL滤液,以1滴/秒的流速全部通过赭曲霉毒素A免疫亲合柱,直至空气进入到亲合柱中。用10 mL真菌毒素清洗液以1-2滴/秒的流速淋洗亲合柱;再用10mL纯水以1-2滴/秒的流速淋洗亲合柱,直至空气进入到亲合柱中。用1.5 mL HPLC级的甲醇以1 滴/秒的流速淋洗亲合柱,将所有样品淋洗液(1.5 mL)收集于玻璃测试管中。将1.5mL淋洗液用1.5mL纯水稀释,混匀,注入HPLC检测;或将1.5mL淋洗液在50℃氮气下吹干,用1mL流动相定容后,混匀,注入HPLC检测。

酒类:将上步10 mL滤液,以1滴/秒的流速全部通过赭曲霉毒素A免疫亲合柱,直至空气进入到亲合柱中。用10 mL冲洗液以1-2滴/秒的流速淋洗亲合柱;再用10mL纯水以1-2滴/秒的流速淋洗亲合柱,直至空气进入到亲合柱中。用1.5 mL HPLC级的甲醇以1 滴/秒的流速淋洗亲合柱,将所有样品淋洗液(1.5 mL)收集于玻璃测试管中。将1.5mL淋洗液用1.5mL纯水稀释,混匀,注入HPLC检测;或将1.5mL淋洗液在50℃氮气下吹干,用1mL流动相定容后,混匀,注入HPLC检测。

 

IAC-SEP®赭曲霉毒素A免疫亲和柱注意事项

 

  1. 亲和柱净化后的洗脱液不能用尼龙膜或有机系膜过滤,负责会损失部分赭曲霉毒素。
  2. 样品添加回收试验时,标准品添加到样品中,静置2小时后或过夜,再进行样品前处理,否则会出现回收率偏低的现象。
  3. 不要随便更改操作说明书中的操作步骤,如需更改要和本公司技术部联系,确认更改是否合理。
  4. 操作步骤中,样品过柱,淋洗,洗脱时,一定要控制好流速,不能太快,否则会使检测结果偏低。
  5. 如果将标准品直接过柱验证回收率时,一定要确保标准上柱液中甲醇浓度不要超过25%,否则会影响柱子的吸附能力。
  6. 试验中使用的玻璃仪器等,一定要清洗干净,尤其是用次氯酸等处理过的仪器,否则会使检测结果偏低
  7. 当用氮气浓缩洗脱液时,氮气流不要太大,否则会损失部分赭曲霉毒素。

 

需要准备的设备及试剂

C/N编号

物品

ZJ0612

Clover12位泵流操作架(配有1台空气泵,610mL针筒)

20202

高速匀质器,转速可达18,000 r/min ~22,000 r/min

31955

美国vicam微纤维滤纸(1.5um100/盒)

31240

折叠式槽纹滤纸(100/盒)

36010

一次性塑料烧杯(25/)

34000

一次性测试管(250/)

36020

塑料漏斗(10 /)

 

赭曲霉毒素A标准品

35016

色谱纯级的甲醇(4/瓶)

 

色谱级乙腈(4/瓶)

C546150-U

Cloversil  C18 反相色谱柱4.6*150mm5um

C546250-U

Cloversil  C18 反相色谱柱4.6*250mm5um

 

玉米、饲料等基质含有不同水平赭曲霉毒素A的质控样品

 

真菌毒素清洗液(10×)

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