T2毒素衍生1-氰酸蒽标准品1-蒽腈1-AN 100mg

1 -蒽腈( 1 an t hr oy l n i t r i l e, 1 -AN ）

T2毒素衍生1-氰酸蒽标准品1-蒽腈1-AN 100mg

提供t2毒素检测耗材，以及解决方案。符合国标5009.118-2016

*法 免疫亲和层析净化液相色谱法
2 原理 用提取液提取试样中的T2毒素,经免疫亲和柱净化、衍生后,用高效液相色谱荧光检测器测定,外 标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3. 1 试剂 3. 1. 1 甲醇( CH3OH):色谱纯。 3. 1. 2 乙腈( CH3CN):色谱纯。 3. 1. 3 甲苯( C 6H5CH3):色谱纯。 3. 1. 4 4 -二甲基氨基吡啶。 3. 1. 5 1 -蒽腈( 1 an t hr oy l n i t r i l e, 1 -AN)。 3. 2 试剂配制 3. 2. 1 提取液:甲醇-水( 8∶2,体积比)。 3. 2. 2 4 -二甲基氨基吡啶溶液:准确称取0. 0325g4 -二甲基氨基吡啶于100mL容量瓶中,用甲苯定容 至刻度。 3. 2. 3 1 -蒽腈溶液:准确称取0. 030g1 -蒽腈于100mL容量瓶中,用甲苯定容至刻度。 3. 3 标准品 T2毒素( C 24H34O9, CAS号: 21259 20 1):纯度≥98. 0%,或经国家认证并授予标准物质证书的标 准物质。 3. 4 标准溶液配制 3. 4. 1 标准储备液:准确称取适量的T2毒素标准品(精确至0. 0001g),用乙腈溶解,配制成浓度为
GB5009. 118—2016
2  100μg/mL的标准储备液,-18℃以下避光保存。 3. 4. 2 标准工作液:根据需要准确吸取适量的标准储备液,用乙腈稀释,配制成5ng/mL、 10ng/mL、 50ng/mL、 100ng/mL、 200ng/mL的标准工作液, 4℃避光保存。 3. 5 材料 3. 5. 1 T2毒素免疫亲和柱:柱规格1mL或3mL,柱容量≥1500ng,或等效柱。 3. 5. 2 玻璃纤维滤纸:直径11cm,孔径1. 5μm,无荧光特性。 4 仪器和设备 4. 1 高效液相色谱仪:配有荧光检测器。 4. 2 高速粉碎机:转速≥12000r /mi n。 4. 3 均质器:转速≥12000r /mi n。 4. 4 氮吹仪。 4. 5 离心机。 4. 6 涡旋混合仪。 4. 7 空气压力泵。 4. 8 试验筛:孔径1. 0mm。 4. 9 天平:感量0. 0001g和0. 01g。 4. 10 超声波发生器:功率>180W。 4. 11 玻璃注射器: 10mL。 5 分析步骤 5. 1 提取 5. 1. 1 粮食及粮食制品 将样品研磨,硬质的粮食等用高速粉碎机磨细并通过试验筛。称取25. 0g(精确到0. 1g)试样于烧 杯中,用提取液溶解,转移至容量瓶中,用提取液定容至100mL,混匀,涡旋振荡提取10mi n,定量滤纸 过滤。移取10. 0mL滤液加入40mL水稀释混匀,经玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清,滤液备用。 5. 1. 2 酱油、醋、酱及酱制品 称取25. 0g(精确到0. 1g)混匀的试样,用甲醇定容至50. 0mL,超声提取10mi n,定量滤纸过滤。 移取10. 0mL滤液加入40mL水稀释混匀,经玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清,滤液备

5. 1. 3 酒类 取脱气酒类试样(含二氧化碳的酒类使用前先置于4℃冰箱冷藏30mi n,过滤或超声脱气)或其他 不含二氧化碳的酒类试样20. 0g(精确到0. 1g)于50mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,摇匀,定量滤纸 过滤。移取10. 0mL滤液加入40mL水稀释,经玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清,滤液备用。 5. 2 净化和洗脱 将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下,准确移取10. 0mL5. 1中的提取滤液,注入玻璃注射器中。将 空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约1滴/s的流速缓慢通过免疫亲和柱,直至空气进入亲和柱中。用10mL水淋洗亲和柱,流速为1滴/s~2滴/s,直至空气进入亲和柱中,弃去全部流出 液,抽干小柱。准确加入1. 0mL甲醇洗脱,流速约为1滴/s,收集洗脱液。 5. 3 衍生 5. 3. 1 标准工作液的衍生:取不同浓度的标准工作液各1mL,在50℃ 下用氮气吹干,加入50μL4 -二 甲基氨基吡啶溶液和50μL1 -蒽腈溶液,在涡旋混合器上混匀1mi n, 50℃反应15mi n,在冰水中冷却 10mi n后取出, 50℃下氮气吹干,用1. 0mL流动相溶解,待HPLC测定。 5. 3. 2 样品的衍生:将5. 2中洗脱液在50℃下用氮气吹干,按5. 3. 1步骤进行。 5. 4 测定 5. 4. 1 高效液相色谱参考条件 高效液相色谱参考条件列出如下: a) 色谱柱: C 18柱,柱长150mm,内径4. 6mm,粒径5μm,或等效柱; b) 流动相:乙腈-水( 75∶25,体积比); c) 流速: 1. 0mL/mi n; d) 检测波长:激发波长381nm,发射波长470nm; e) 进样量: 20μL; f) 柱温: 35℃。 5. 4. 2 色谱测定 在5. 4. 1色谱条件下,将系列T2毒素标准工作液按浓度。

T2毒素衍生1-氰酸蒽标准品1-蒽腈1-AN 100mg