您好!欢迎访问北京中检维康生物技术有限公司网站!
全国服务咨询热线:

400-6677-658

当前位置:首页 > 技术文章 > 2020版药典之真菌毒检测黄曲霉毒素检测亲和柱使用方法

2020版药典之真菌毒检测黄曲霉毒素检测亲和柱使用方法

发布时间:2022-05-27      点击次数:119

CNtest 黄曲霉毒素总量免疫亲和柱-中药专用
(产品编号: QHZ103-ZY
使用对象
CNtest免疫亲和柱由中检维康完全自主开发的系列产品,广泛地应用于中药、粮食、食品、饲料、坚果、植物油、调味品和酒类等样品的检测,该方法具有操作简单、准确性高,灵敏度高等特点。
CNtest黄曲霉毒素免疫亲和柱-中药专用柱是根据《中国药典2020版-2351真菌毒素测定法》独立开发的产品,它适用于药典中黄曲霉毒素亲和柱检测方法。同时我们对部分检测方法进行了优化,为大家提供更好的解决方案。
原理
样品经提取液提取、过滤、稀释,然后通过键合有黄曲霉毒素特殊抗体的免疫亲和柱。此时,黄曲霉毒素被亲和柱中的抗体特异性的吸附, 用水或缓冲液将免疫亲和柱上的杂质除去,然后用甲醇使抗体变性,从而将黄曲霉毒素从亲和柱上洗脱下来。最后, 用HPLC或荧光计进行定量检测。
储存条件
该亲和柱保存在2-8 °C条件下,绝对不能冷冻,保质期为18个月。建议在室温(18-30°C)下使用。
实验溶液制备
1) 提取液,甲醇/水(7+3): 取70mL甲醇加30mL水,混合均匀。
2) 提取液, 乙腈/水(9+1): 取90mL乙腈加10mL水,混合均匀。
3) HPLC流动相, 甲醇-乙腈-水(20+18+62, v/v): 取200mL甲醇、180mL乙腈、 620mL水,混合均匀, 用0.22微米的尼龙筛过滤。
4) 标准溶液的配制: 取黄曲霉毒素混标(46304-U, B1和G1为1.0ug/mL,B2和G2为0.3ug/mL), 甲醇为稀释液,配制标准品溶液。例如:取100uL标准品原液于10mL容量瓶中,用甲醇定容至10mL,那么, 黄曲霉毒素B1和G1为10ng/mL,黄曲霉毒素B2
和G2为3ng/mL.
注:配制好的标准品溶液2-8冷藏保存有效期为24h
5) 淋洗缓冲液: 量取100mL 10X Clover淋洗缓冲液(货号:C3007) 用900mL纯水稀释,混匀。
6) 中药专用稀释液: 量取100mL 10X Clover中药专用稀释液(货号: C3008) 用900mL纯水稀释,混匀。
液相色谱条件
色谱柱: CNtestsil AFT-C18 4.6*250mm(5um)
流动相: 甲醇-乙腈-水(20+18+62, v/v)
流速: 0.8mL/min
检测器: 荧光检测器,激发波长360nm,发射波长450nm
进样体积: 20~100uL
光化学衍生系统: 光化学衍生器(254nm)
分析步骤
1 2020 版-2351 真菌毒素测定法-黄曲霉毒素测定法第一法和第二法:
1.1 样品提取及稀释:
准确称取试样15.0g于均质杯中, 加入3g氯化钠, 准确加入75.0mL甲醇-水(7+3),以均质器高速搅拌提取2min(搅拌速度大于11000r/min) 。 普通滤纸过滤或4000RPM离心5min,准确移取15.0mL滤液或上清液置于50mL容量瓶中, 用纯水稀释至50mL, 混匀。 用玻璃纤维滤纸过滤,至滤液澄清,量取20mL滤液备用;或 4000RPM离心10min,量取20ml上清液备用。
1.2 样品的净化
将免疫亲和柱连接于20.0mL玻璃注射器下。准确量取20mL处理好的样品滤液或上清液注入玻璃注射器中,将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约3mL/min(1滴/秒)流速缓慢通过免疫亲和柱, 直至2~3mL空气通过柱体。以3mL/min(1-2滴/秒)流速用10.0mL水淋洗柱子2次(必要时可以用淋洗缓冲液10mL淋洗,再用水10mL淋洗) ,弃去全部流出液,并使2mL~3mL空气通过柱体。准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱, 控制2mL/min(1滴/秒) 流速, 收集全部洗脱液,混匀,注入HPLC检测。
2 中检维康优化方法:
1.1 样品提取及稀释:
准确称取试样15.0g于50mL离心管中, 加入3g氯化钠, 准确加入75.0mL乙腈-水(9+1),以均质器高速搅拌提取2min(搅拌速度大于11000r/min)。普通滤纸过滤或4000RPM离心5min,准确移取3.0mL滤液或上清液置于50mL离心管中, 加入27mL Clover中药专用稀释液稀释, 混匀。 用玻璃纤维滤纸过滤,至滤液澄清,量取20mL滤液备用。
注意: 如果样品提取液用Clover中药专用稀释液稀释后有大量固体沉淀产生,请改为Clover淋洗缓冲液稀释样品提取液。
1.2 样品的净化
将免疫亲和柱连接于20.0mL玻璃注射器下。准确量取20mL处理好的样品滤液注入玻璃注射器中,将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约3mL/min(1滴/秒)流速缓慢通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过柱体。以3mL/min(1-2滴/秒)流速用10.0mL水淋洗柱子,弃去全部流出液,并使2mL~3mL空气通过柱体。 准确加入2.0mL色谱级甲醇洗脱(注:可以用1ml甲醇洗脱,提高方法检测灵敏度) , 控制2mL/min(1滴/秒)流速,收集全部洗脱液,混匀,注入HPLC检测。
注意事项
1) 样品添加回收试验时,标准品添加到样品中,静置 2 小时后或过夜,再进行样品前处理,否则会出现回收率偏低的现象。
2) 不要随便更改操作说明书中的操作步骤,如需更改要和本公司技术部联系, 确认更改是否合理。
3) 操作步骤中,样品过柱,淋洗,洗脱时,一定要控制好流速,不能太快,否则会使检测结果偏低。
4) 如果将标准品直接过柱验证回收率时,一定要确保标准上柱液中甲醇浓度不要超过 25%, 乙腈浓度不要超过 20%, 否则会影响柱子的吸附能力。
5) 试验中使用的玻璃仪器等,一定要清洗干净,尤其是用次氯酸等处理过的仪器,否则会使检测结果偏低。
需要准备的设备及试剂(中检维康提供)

C/N 编号物品
PHRED美国奥拉 AURA 光化学衍生器
UVD科乐福 CLOVER 光化学衍生器
21022科乐福 CLOVER 六位泵流操作架(配有 1 台空气泵, 6 个
10mL 针筒)
20202高速匀质器,转速可达 18,000 r/min 22,000 r/min
31955-C美国 CLOVER 微纤维滤纸(1.5um, 100 张/盒)
31240-C折叠式槽纹滤纸(100 张/盒),或中速定性滤纸
36010-C一次性塑料烧杯(25/包)
34000-C一次性测试管(250 支/包)
36020-C塑料漏斗(10 个/包)
46304-U黄曲霉毒素混合标准品 1.0mL (B1 和 G1 为 1.0ug/mL,B2
和 G2 为 0.3ug/mL)
35016色谱纯级的甲醇(4 升/瓶)
N546250-AFT中检维康 CNtestsil AFT-C18 反相色谱柱 4.6*250mm
(5um)
玉米、饲料等基质含有不同水平黄曲霉毒素的质控样品
C3007-25010X Clover 淋洗缓冲液
C3008-25010X Clover 中药专用稀释液


北京中检维康生物技术有限公司
地址:北京市顺义区牛栏山镇腾仁路22号3幢2层201室
邮箱:info@clovertek.com
传真:86-010-88026856
关注我们
欢迎您关注我们的微信公众号了解更多信息:
欢迎您关注我们的微信公众号
了解更多信息