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中检维康黄曲霉毒素ELISA试剂盒

简要描述:中检维康iELisa 黄曲霉毒素ELISA试剂盒。本产品是利用抗体-抗原免疫反应检测原理建立的一种定量检测试剂盒。加入黄曲霉毒素M1(AFLA M1)标准品或样品后,黄曲霉毒素M1与微孔中的抗体相结合。

  • 产品型号:CE102,96T
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2021-12-15
  • 访  问  量:453

详细介绍

品牌科乐福clover产地类别进口
应用领域环保,食品,生物产业,农业,制药

 中检维康iELisa黄曲霉毒素ELISA试剂盒

  1. 概要
  2. 黄曲霉毒素是一类真菌(如黄曲霉和寄生曲霉)的有毒的代谢产物,它们具有很强的致癌性. 黄曲霉毒素M<苏b>1是黄曲霉毒素B<苏b>1的代谢产物。经摄入含有黄曲霉毒素B<苏b>1饲料的奶牛产出的牛奶中,其中便含有黄曲霉毒素M<苏b>1。由于黄曲霉毒素M<苏b>1相当稳定,巴氏灭菌法也无法将其杀灭,所以检测黄曲霉毒素M<苏b>1不仅要在饲料原料中检测,而且在终产品中的含量也需要进行测定。用iELisa 黄曲霉毒素M<苏b>1快速检测试剂盒可以准确地检测牛奶、酸奶、奶酪和奶粉中的黄曲霉毒素 M<苏b>1

  3. 原理
  4. 本产品是利用抗体-抗原免疫反应检测原理建立的一种定量检测试剂盒。加入黄曲霉毒素M<苏b>1AFLA M<苏b>1)标准品或样品后,黄曲霉毒素M<苏b>1与微孔中的抗体相结合。洗去没有结合的黄曲霉毒素M<苏b>1,加入酶标抗原,与黄曲霉毒素M<苏b>1与抗体没有结合的部位相结合。洗去没有结合的酶标抗原,加入TMB底物显蓝色,加入终止液后颜色由蓝变黄,用酶标仪在450nm处检测,吸光值与样品中黄曲霉毒素M<苏b>1含量成负相关,与标准曲线比较即可得出黄曲霉毒素M<苏b>1的含量。

    3. 试剂盒的组成

  5. 包被有抗体的96微孔板:1块(96 孔,12 ×8 孔)
  6. AFM1标准品:0 ng/mL 0.05 ng/mL0.1 ng/mL0.2 ng/mL0.5 ng/mL
  7. 1 × 1.0mL                   

  8. AF-M1酶标抗原:            1 × 15mL
  9. 10× 浓缩洗涤液:            1 × 50mL
  10. AF-M1稀释缓冲液:           1 × 50mL
  11. 显色底物液:                1 ×12mL
  12. 反应终止液:                1 × 13mL
  13. 试剂盒说明书
  14. 质控报告
  15. 需要的仪器、试剂
  16. 1)仪器

  17. 酶标仪450nmiELisa全自动酶标仪或相当者)
  18. 微量移液器:20μL-200μL单道,100μL-1000μL单道, 50μL-300μL八道
  19. 高速离心机
  20. 酶标板振荡器
  21. 涡旋混合器
  22. 振荡器
  23. 蒸发设备、恒温箱
  24. 100mL量筒
  25. 计时器
  26. 天平:感量0.01g
  27. 离心管1.5mL50mL
  28. 2)试剂

  29. 甲醇、正庚烷、二氯甲烷
  30. 样品处理
  31. 5.1 牛奶:

  32. 取牛奶1.0 mL样品,用离心机(4000RPM)离心10min.
  33. 离心后用移液器*去除上层奶油。
  34. 200μL下层脱脂牛奶,加入200μLAF-M<苏b>1稀释缓冲液(1:1)稀释。
  35. 稀释倍数:2

    5.2 酸奶:

  36. 取酸奶样品2.0g,用离心机(4000RPM)离心10分钟。(如没有冷冻离心机,可将样品先冷却到10℃,再离心)
  37. 离心后,取200μL上层澄清液于1.5mL离心管中,加入200μL AF-M<苏b>1稀释缓冲液(1:1)稀释,涡旋混合器混匀。
  38. 稀释倍数:2

    5.3 奶粉:

  39. 用天平称取2.0g奶粉到锥形瓶中,再加入10mL 50左右的纯水(复原乳)。
  40. 用力振荡3分钟.,使充分溶解。
  41. 按照5.1牛奶样品处理步骤进行。
  42. 稀释倍数:10 (检测范围:0.5---5 ppb

    5.4 奶粉(高灵敏度):

  43. 用天平称取2.0g奶粉到锥形瓶中,再加入5mL 50左右的纯水(复原乳)。
  44. 用力振荡3分钟.,使充分溶解。
  45. 按照5.1牛奶样品处理步骤进行。
  46. 稀释倍数为5(检测范围:0.25---2.5 ppb

    5.5 奶酪:

  47. 用天平称取2.0g粉碎的奶酪放入离心瓶中,加入40.0mL二氯甲烷,充分溶解混匀后,剧烈振荡15分钟.
  48. 过滤,取10.0mL60℃氮气吹干。
  49. 分别加入0.5mL甲醇、0.5mL PBS1.0mL庚烷,复容。
  50. 3000/分钟离心15分钟.
  51. *去除上层庚烷。
  52. 100μL下层提取液于1.5mL离心管中,加入400μL AF-M<苏b>1稀释缓冲液(1:4)稀释,涡旋混合器混匀,取100μL用于检测。
  53. 稀释倍数:10

    6 酶联免疫分析程序

    6.1测定之前注意事项

  54. 使用前将所有试剂平衡至室温(20-25℃)。
  55. 使用后迅速将试剂放入2-8℃冷藏。
  56. ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
  57. 所有温育过程应避免阳光直射,并按要求用盖板覆盖住酶标板。
  58. 6.2溶液的配制

    洗涤液的配制:将浓缩洗涤液用纯水稀释10倍后使用。(例如:取10 mL 浓缩液+90 mL纯水, 可以用于32孔的检测)。

    6.3测定程序

  59. 将足够标准品和样品所用数量的孔条插入酶标板架,标准品和样品做两个平行实验,记录下标准和样品的位置。未使用的酶标板用铝箔袋封好置2-8℃冷藏保存。
  60. 分别吸取100μL标准品和样品加至相应的微孔(双孔)中,,加盖,室温抚育50分钟.
  61. 倒出孔中的液体,每孔加入250μL稀释好的洗涤液,置于酶标板振荡器上振荡30秒(或者手工振荡),重复操作四次。洗完后用力在吸水纸上拍干。
  62. 每孔加入AF-M<苏b>1酶标抗原100μL,加盖,室温抚育30分钟.
  63. 倒出孔中的液体,每孔加入250μL 稀释好的洗涤液,置于酶标板振荡器上振荡30秒(或者手工振荡),重复操作四次。洗完后用力在吸水纸上拍干。
  64. 每孔加入100μL显色底物液,加盖,室温抚育10分钟.
  65. 每孔加入50μL反应终止液。
  66. 置于酶标仪中,振荡混匀,在450nm处测定吸光度值(OD值),参考波长630nm。(iELisa全自动酶标仪可以直接读出、打印浓度值)
  67. 7.  结果判定

  68. 所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值(B)除以di一个标准(0标准)的吸光度值(B<苏b>0)再乘以100%,即百分吸光度值。
  69. 百分吸光度值(%)=

    B

    ×100%

    B<苏b>0

    以黄曲霉M1标准品浓度值(ppb)为X轴,百分吸光度值为Y轴,绘制标准曲线图。相对应每一个样品的浓度可以从标准曲线上读出。也可以用回归方程法,计算出样本溶液浓度。利用计算机专业软件,更便于大量样品的快速分析。

  70. 样品的实际浓度为读数结果乘以相应稀释倍数。
  71. 如果测定值超出检测范围,样品提取溶液按一定的比例用阴性牛奶样品进行稀释。
  72. 8.  注意事项

  73. 室温低于20℃或试剂及标本未回到室温(20- 25℃)会导致数值偏低。
  74. 在洗板过程中如果出现板孔干燥过久的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。
  75. 标准物质和显色液对光敏感,避免直接暴露在光线下。
  76. 混合要均匀,洗板要*(包括加样品和标准液的时候都必需充分混合均匀)。
  77. 反应停止液为强酸性物质,避免接触皮肤。
  78. 不要使用过了有效期的试剂盒,也不要混合使用不同批次的试剂盒,这样会引起测定结果不准确。
  79. 试剂盒的储存条件是2-8℃,切勿冷冻。
  80. 9.  检测方法灵敏度、准确度、精密度

    1)试剂盒灵敏度: 0.05ppb

    2)检测范围:牛奶0.1---1.0 ppb

                 酸奶0.1---1.0 ppb

               奶粉0.5---5.0ppb0.25---2.5 ppb

      奶酪0.5---5.0ppb

    3)试剂盒变异系数:小于20%

    4)试剂盒准确度:回收率范围在70%-120%之间

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