酱油中桔青霉素的检测

　　橘青霉素是青霉属、曲霉属和红曲霉属等丝状霉菌产生的一种次生代谢产物,在谷物类(稻米、小麦和玉米等)、柑橘类、传统产业的红曲行业等产品中广泛存在,给消费者的食品安全带来了很大的风险。橘青霉素作用的靶器官是肾脏,人和动物摄入被橘青霉素污染的产品后,可引起肾脏肿大、尿量增多、肾小管扩张和上皮细胞变性坏死等症状,甚至还可以导致胎儿畸形、诱发肿瘤、致突变等严重的后果。
 

　　原理
 

　　样品经提取液提取、过滤、稀释，然后通过键合有桔青霉素特殊抗体的免疫亲和柱。此时，桔青霉素被亲和柱中的抗体特异性的吸附，用水或缓冲液将免疫亲和柱上的杂质除去，然后用甲醇使抗体变性，从而将桔青霉素从亲和柱上洗脱下来。最后，用HPLC或液质方法进行定量检测。
 

　　检测流程：
 

　　样品提取及稀释：
 

　　称取5g样品，置于100mL容量瓶中。加入甲醇/水(7+3)溶液，定容至100mL。将定容后溶液倒入均质器中，以均质器高速匀质提取2min。将提取物到入槽纹滤纸或普通滤纸上，滤液收集于干净的容器中。移取1mL上步的滤液，置于干净的容器中。用39mLpH 7.0 PBS溶液：稀释，混匀。将上步稀释液通过玻璃微纤维过滤器，滤液收集于玻璃注射器筒中，量取10mL准备上柱净化。
 

　　样品的净化
 

　　将上步10 mL滤液，以1滴/秒的流速全部通过免疫亲和柱，直至空气进入到亲和柱中。用10 mLpH 7.0 PBS溶液或0.1%吐温20-PBS溶液以1-2滴/秒的流速淋洗亲和柱。用1mL 洗脱液(甲醇-0. 1%磷酸溶液70+30)以1 滴/秒的流速淋洗亲和柱，将所有样品洗脱液收集于玻璃测试管中，混匀，注入HPLC检测